Aplicarea laparoscopului veterinar în colecția de ovocite bovine Fertilizarea in vitro
Aplicarea laparoscopului veterinar în colecția de ovocite bovine fertilizare in vitro.
Rata de recuperare a ovocitelor colectate prin tehnica laparoscopică este mai simplă decât cea de colectare a ouălor direct din ovar. În plus, laparoscopia veterinară poate fi utilizată pentru a verifica dezvoltarea foliculară.
Inserarea laparoscopului: introduceți trocarul contondent în canulă, introduceți canula în vagin, poziționați capătul frontal al canulei în poziția prestabilită a bolții vaginale prin strângerea rectală, apoi retrageți trocarul contondent, introduceți trocarul piramidei și reglați unghiul. Faceți direcția trocarului și axa lungă a vacii ușor spre dreapta la un unghi de 10 ° și pătrundeți cu forță în bolta vaginală în sus. Dacă rezistența scade brusc, indică faptul că bolta vaginală a fost străpunsă. În acest moment, scoateți trocarul. Când auziți sunetul aerului care intră și mâna care ține rectul simte expansiunea cavității abdominale în același timp, aceasta indică faptul că poziția de perforare este corectă. Învelișul din oțel inoxidabil cu țeava endoscopului este introdus în manșon. Conform senzației de rect, dacă cavitatea este mică, trebuie umplută cu ceva CO2. Viteza de admisie a aerului trebuie controlată în general la 7 ~ L / min. Cantitatea de gaz umplută depinde de mărimea vacii."În general, este în jur de 9L.
Colectarea ovocitelor: Operatorul de prindere rectală trebuie să regleze în permanență poziția laparoscopului și a ovarului și să afișeze forma foliculilor și corpului galben în diferite poziții ale ovarului, pentru a determina foliculii care trebuie perforați. Un asistent apucă parola operatorului și foliculul afișat pe ecran în funcție de rect, acționează acul de puncție, colectează fluidul folicular și introduce fluidul folicular în tubul de colectare care a fost adăugat cu o cantitate mică de fluid de cultură. Un alt asistent este responsabil pentru operarea pompei de vid picior. Pentru a preveni pierderea ovocitelor, pompa de vid trebuie pornită (presiunea negativă trebuie să fie de 100 mm Hg) înainte de puncție. După colectare, lichidul folicular este plasat în raftul eprubetei timp de 5-10 minute, iar lichidul folicular din partea de jos a tubului de colectare este aspirat în placă cu un pai și apoi observat la microscopul optic. Iar ovocitele detectate sunt aspirate în tubul subțire. Cele două capete ale tubului subțire sunt sigilate, iar ovocitele pot fi transportate la laborator pentru cultură matură. După finalizarea operației, se scoate țeava endoscopului, iar cei doi asistenți apasă pe ambele părți ale peretelui abdomenului vacii pentru a expulza gazul din cavitatea abdominală. Când gazul nu mai este evacuat, canula este scoasă și vaginul este verificat la fiecare două zile pentru a preveni infecția. Cele două capete ale tubului subțire sunt sigilate, iar ovocitele pot fi transportate la laborator pentru cultură matură. După finalizarea operației, se scoate țeava endoscopului, iar cei doi asistenți apasă pe ambele părți ale peretelui abdomenului vacii pentru a expulza gazul din cavitatea abdominală. Când gazul nu mai este evacuat, canula este scoasă și vaginul este verificat la fiecare două zile pentru a preveni infecția. Cele două capete ale tubului subțire sunt sigilate, iar ovocitele pot fi transportate la laborator pentru cultură matură. După finalizarea operației, se scoate țeava endoscopului, iar cei doi asistenți apasă pe ambele părți ale peretelui abdomenului vacii pentru a expulza gazul din cavitatea abdominală. Când gazul nu mai este evacuat, canula este scoasă și vaginul este verificat la fiecare două zile pentru a preveni infecția.
Precauții:
1. Anestezie: nu prea superficială sau prea adâncă. Anestezia eficientă este o condiție prealabilă pentru finalizarea puncției foliculare pentru a obține ovocite. Dacă anestezia este prea superficială, vaca va simți durere și va afecta precizia operației, iar anestezia ar trebui completată. Dacă anestezia este prea adâncă, vaca nu va sta în picioare stabilă, nici măcar nu se va întinde, ceea ce va afecta și operația. Dacă vaca este culcată, operația trebuie oprită imediat, iar canula și tubul laparoscopic trebuie retrase rapid. În același timp, trebuie acordată atenție eliberării Baodingului la timp pentru a evita rănirea vacii.
2. Puncție: Dispozitivul de prindere rectal ar trebui să prindă corect unghiul de puncție atunci când punce bolta vaginală pentru a preveni puncția rectului și a intestinului gros. La puncția foliculului, acul nu trebuie străpuns prea adânc, altfel va deteriora substanța ovariană și va provoca hemoragii. Acest lucru nu numai că va contamina lichidul folicular, va afecta detectarea ovocitelor, va bloca ace și conducte, dar va afecta și dezvoltarea foliculilor de pe ovar. recupera. În caz de sângerare, puncția foliculului trebuie oprită imediat, acul și cateterul și tubul de colectare trebuie înlocuite, iar acul și cateterul trebuie spălate cu 0,01 mg heparină / ML ser fiziologic înainte de următoarea puncție a foliculului.
3. Colectarea lichidului folicular: Lichidul folicular colectat trebuie menținut la o temperatură constantă cât mai mult posibil. Cel mai bine este să detectați ovocitele imediat după colectare și să le puneți într-un mediu de cultură matură care conține FSH, să le ambalați în tuburi subțiri și să le transportați la laborator, în general din timpul de la recoltare la incubator pentru cultura de maturare nu trebuie să depășească 4 ore.
4. Abilități: Utilizarea cu succes a acestei metode necesită nu numai echipamente bune, ci și operatorului să aibă un nivel ridicat de cunoștințe și competență în operarea practică, precum și o cooperare strânsă cu doi asistenți. Prin urmare, instruirea necesară trebuie efectuată înainte de operația experimentală.
În plus, această metodă poate fi utilizată și pentru obținerea ovocitelor de la vaci tinere în avans, crescând astfel perioada de utilizare și potențialul reproductiv al vacilor și accelerând progresul genetic. Această metodă va fi o modalitate bună de a obține surse de ovule după superovulație și utilizarea ovarelor izolate.
